影響ELISA試劑盒靈敏度常出現的問題及解決辦法

ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。上海研域生物將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結一下，以期給同行帶來—些啟發，提高試驗質量。

1、超過有效期。試劑盒必須在有效期內使用，超過有效期的產品可能會產生很弱的信號。

2、試劑盒沒有按規定進行保存，受高溫影響。

3、試劑、樣品用前未平衡至室溫

4、加入試劑的體積和時間有誤，移液器計量不準，吸嘴內水分太多或不清潔。

5、洗板及加樣過程中，酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力，

6、孵育時間及孵育溫度未達到要求，反應板放入培養箱時注意溫度并及時調整。

7、洗板次數過多，或濃縮洗液稀釋倍數不符合要求，洗滌沖擊力太大，浸泡時間太長等，

8、顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入。

9、底物作用時間不夠，

10、燕餾水水質有問題

ELISA試劑盒靈敏度出現問題相應的解決方法

1、實驗前檢查試劑的組分及批號，確認試劑未過期,

2、不要將試劑盒長時間置于常溫下，按便用規定儲藏。

3、試劑、樣品用前平衡至室溫

4、確定所使用的試劑體積正確，加入時間適當。校正移液器，移液器與吸晚配合要緊密吻合。移液不宣太快，盡量排放完。

5、確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如愛氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗千凈，確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。

6、孵育溫度應控制在37-38C，孵育時間嚴格按照說明書操作。保溫期內不宜多開門，以免影響保溫。

7、嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數，

8、顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合。

9、準確定時。

10、測定燕餾水配制試劑對酶免疫法的影響。