PCR在臨床中的應用（二）

1、檢測甲型病毒性肝炎

 HAV為甲型病毒性肝炎的病原體。甲型肝炎病毒為嗜肝RNA病毒?？?HAV IgM和抗-HAV IgG等抗體成分為其血清標志物。[臨床意義]  血液中抗-HAV IgM型抗體在發病后1~2周內出現，3個月后滴度下降，6個月后不易檢出， 該抗體陽性，即可診斷為急性甲型肝炎。抗-HAV IgG出現較抗-HAV IgM稍晚，一般終身存在，是一種保護性抗體，可用于甲肝的流行病學調查。

 2、檢測戊型肝炎病毒

是一種RNA病毒。臨床診斷HEV的血清標志物為抗- HEV IgM 和抗- HEV IgG。 健康人檢查結果均為陰性。 抗- HEV IgM 陽性反應，可診斷急性戊肝，持續時間2~3個月?；謴推诨颊哐逯锌蓹z出抗- HEV IgG，持續時間約1年。

 3、檢測丁型肝炎病毒

是一種RNA病毒。臨床診斷HDV的血清標志物為HDV Ag、抗- HDV IgM 和抗- HDV IgG 等三種。 健康人檢查結果均為陰性。  H DV感染時，HDV Ag陽性。抗- HDV IgM 陽性，見于急性HDV感染?？? HDV  IgG陽性，是診斷慢性丁肝的可靠血清學指標。

 4、尖銳濕疣患者外周血中HPVDNA的檢測

尖銳濕疣（CA）病情頑固，極易復發。過去的研究一直認為HPV是嚴格的親上皮病毒。但有人研究發現血液中能檢出HPVDNA。中國醫科大學附屬*醫院皮膚科的研究人員推測尖銳濕疣在HPV感染的病程中可能存在病毒血癥，可能是易感部位CA復發或其他部位出現CA病變的病毒來源。為此研究人員對30例CA患者外周血中HPVDNA進行了檢測。方法：采用聚合酶鏈反應（PCR）檢測30例CA患者皮損和外周血中的HPVDNA，20例正常人外周血作對照。采用限制性內切酶RsaⅠ、PstⅠ對HPV做分型鑒定。選取1例皮損與外周血均為陽性的PCR產物進行測序。結果：30例CA患者皮損均檢出HPVDNA，血漿中未檢測到HPVDNA，有8例外周血單一核細胞（PBMC）中檢測到HPVDNA（陽性率為26.7％），20例正常人對照為陰性。兩組陽性率經χ2校正檢驗χ2＝4.52，P＜0.05，差異有顯著性。酶切和測序結果顯示，PBMC中的HPV型別與其皮損處的型別有一致性。結論：CA患者在HPV感染的病程中可能存在病毒血癥，這可能是CA易于復發的原因之一。本研究結果提示，病毒在局部大量繁殖有可能破壞局部基底膜帶，通過血管入血。此外，在PBMC中檢測到HPV提示，該病可能有性傳播以外的途徑經血行傳播的可能。

5、評價熒光定量PCR（QPCR）技術對不孕癥婦女宮頸沙眼衣原體和解脲支原體檢測意義.

方法:用QPCR技術對60例不孕癥患者（不孕組）及78例正常生育者（對照組）行宮頸沙眼衣原體（CT）和解脲支原體（UU）檢測.結果:不孕組宮頸分泌物CTDNA、UUDNA及混合感染陽性檢出率明顯高于對照組（P＜0.05＝.結論:QPCR對不孕癥患者宮頸CTDNA、UUDNA的檢測特意性強、快速、靈敏,臨床應用價值高. 
 
 6、快速診斷將宮頸粘膜、皮膚、口腔、角膜等組織細胞涂片后，用特異性抗體作間接免疫熒光或免疫組化染色法檢測病毒抗原；Wright-Giemsa染色鏡檢，如發現核內包涵體及多核巨細胞，可考慮HSV感染；將皰疹皰液進行電鏡負染可迅速確診。原位核酸雜交和PCR法可用于檢測HSVDNA。PCR產物的特異性鑒定選用Southernblot法，腦脊液PCR擴增被認為是診斷皰疹性腦炎的*手段。此外，DNA酶切圖譜也可作HSV鑒定和型別分析。HSV抗體測定對臨床診斷意義不大，僅用于流行病學調查



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PCR在臨床中的運用（一）