影響ELISA試劑盒檢測因素

ELISA試劑盒即酶聯免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法靈敏，特異性強不需要特殊設備，所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，在臨床檢驗中除正常反應外，有時常可見到一些錯誤結果（即假陽性或假陰性結果）。本公司為大家解讀ELISA檢測的影響因素。

一、標本的影響

 溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質（紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態氧（O），從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質，即顯藍色，產生假陽性［2］。所以嚴重溶血標本禁用。

標本受細菌污染。因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。

標本保存不當。在冰箱中保存過久的標本，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5 d內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。

塑料試管能吸附抗原物質，樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。使用真空采血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。

標本凝固不全。 在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

二、 試劑影響

ELISA試劑盒檢測試劑廠家較多；不同廠家出產的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別，使用質劣的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。因此，選擇高質量的試劑是保證結果準確的關鍵之一。

三、操作技術的影響

吸量的準確性。吸量不準確，直接影響檢測結果。因此加樣器也要經常清洗，定期校準。

溫育影響。抗原抗體結合及酶促反應對溫度有嚴格要求，酶標板周圍與內部孔升降溫速率不同，造成周邊與內部孔結果差異；干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。

加樣次序影響。有時我們在加樣過程中，常常會遇到個別標本未離心等情況，為了節約時間，往往這時我們會先加酶結合物，然后等標本分離好后再加標本，這樣，竟常常會造成HBeAb和HBcAb的假陰性。因為HBeAb和HBcAb都是競爭抑制法，先加入酶標記的抗體，首先與固相載體上的抗原結合，待加入顯色劑后，因酶的存在而顯色，故呈陰性［3］。

洗滌方法對結果的影響。洗滌是ELISA操作的重要環節，手洗條件一致性較差，對結果影響較大，全自動洗板機使用不當也會影響結果，血清中殘留的的纖維蛋白絲或洗滌液析出的結晶易使洗板機針小孔處于阻塞狀態，造成未結合標記酶洗脫不*，導致“花板”造成假陽性或假陰性；所以操作洗板機過程中要不時觀察洗板機針孔內洗液的通暢狀況，洗板機不用時應用去離子水清洗幾遍。

干擾物質的影響。有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果；常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、、交叉反應物質和其他物質等。如RF因子可與標記二抗的FC段法結合造成假陽性，高濃度的AFP（如孕婦），在儲存過程中可能形成二聚體會導致本底過深影響檢測結果。

綜上所述，對臨床檢驗ELISA測定中出現的假陽性或假陰性結果，要從多方面進行分析除試劑因素和操作因素之外，更多的應從標本因素方面進行分析，并采取相應措施排除干擾作用。