ELISA試劑盒的技術(shù)手段

    現(xiàn)在做方陣，做ELISA試劑盒已是輕車(chē)熟路了，以前檢測(cè)一種抗體用整整一下戰(zhàn)書(shū)還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，一個(gè)工作日基本搞定。可是在新老手操縱過(guò)程中老是會(huì)泛起或大或小的題目，本人在剛開(kāi)始做ELISA試劑盒時(shí)就面對(duì)良多災(zāi)題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是經(jīng)常做得烏煙瘴氣，好比說(shuō)花板，假陽(yáng)性，全顯色，全部顯色，顯色比空缺還低。大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。

    小分子必需依賴(lài)和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。還有有的包被原可能不是蛋白，對(duì)于生物素和脂類(lèi)物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被，ELISA試劑盒親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法平均、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

    ELISA試劑盒試驗(yàn)中，檢驗(yàn)同一樣本達(dá)20次以上時(shí)，就會(huì)發(fā)現(xiàn)這組數(shù)據(jù)（指測(cè)定結(jié)果的吸光值）分布在均值兩側(cè)，大部分集中在均值附近。如果以測(cè)定值為橫坐標(biāo)，以出現(xiàn)的頻率為縱坐標(biāo)作圖，就可繪出一個(gè)呈鐘形的曲線(xiàn)圖。鐘頂處為均值，其他值以均值為中心對(duì)稱(chēng)分布，這就是正態(tài)分布。